故事紧接着上一部继续发展。延科（查宁·塔图姆 Channing Tatum 饰）和施密特（乔纳·希尔 Jonah Hill 饰）好不容易从高中“顺利毕业”，等待着他们的，却是又一轮卧底行动，这一次，他们要挑战的对象是“大学”。和高中相比，大学里人际关系的复杂程度和课业难度都要更上一层楼，这一次，兄弟两人能够顺利完成任务吗？
　　在学园中，延科加入了校足球队，结识了一帮志同道合的好友，与此同时，施密特选择就读艺术系，与古灵精怪的玛雅（安珀·史蒂芬斯 Amber Stevens 饰）发生了一段浪漫轶事。然而，丰富精彩的大学生活令密不可分的延科和施密特之间产生了裂痕，这裂痕之巨大很可能导致患难与共的两人最终分道扬镳。

　　王后阿尔克墨涅（罗姗妮·麦琪 Roxanne McKee 饰）无法忍受丈夫安菲特律翁（斯科特·阿特金斯 Scott Adkins 饰）对人民的残暴统治，向神祈求帮助，于是，她诞下了背负着推翻王权统治的责任的儿子赫拉克勒斯（凯南·鲁兹 Kellan Lutz 饰），可是，对于自己的使命，赫拉克勒斯一无所知。
　　国王宠爱长子伊菲克勒斯（利亚姆·加里根 Liam Garrigan 饰），却对赫拉克勒斯嗤之以鼻。之后，赫拉克勒斯爱上了美丽的赫伯公主（盖娅·威斯 Gaia Weiss 饰），然而，国王却将河公主许配给了伊菲克勒斯。伊菲克勒斯虽然表面上待弟弟十分宽厚，背地却是个两面三刀的小人，为了能够和所爱的人双宿双飞，赫拉克勒斯决定同赫伯公主私奔，然而却被护卫拦下，等待着他的，将会是残酷的惩罚。

　　一群由穷凶极恶的死刑犯组成的特种小队，小丑女、死亡射手、回旋镖队长、黑蜘蛛、冰霜杀手、鲨鱼王、克格勃野兽等人，受制于植入脑后的纳米炸药，他们被迫受命闯入阿卡姆疯人院，去取得一份被谜语人窃走的秘密名单。小队成员互相猜忌，各怀心思，哥谭的黑暗骑士又会不会任由自杀小队完成任务呢？囚禁于阿卡姆的小丑和其他恶人又会对任务造成怎样的影响？